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B 40/49
 DB34
安 徽 省 地 方 标 准
DB 34/T 1577—2011

规?;沓≈碓不凡《静》揽丶际豕娉?br/>Technical regulations of prevention and control of porcine circovirus disease for
istersive pig farms


2011 - 12 - 16 发布 2012 - 01 - 16 实施
陕西省质量技术监督局 发 布DB34/T 1577—2011
I
前 言
猪圆环病毒病已成为严重危害世界养猪业的一种新的重要传染病,我国将其列为二类动物疫病。为
预防和控制猪圆环病毒病,依据《中华人民共和国动物防疫法》和其它相关法律法规,制定本规程。
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
本标准由陕西农业大学,陕西省动物疫病预防控制中心,陕西安泰农业开发有限责任公司提出。
本标准由陕西省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:陕西农业大学,陕西省动物疫病预防与控制中心,陕西安泰农业开发有限责任公
司。
本标准主要起草人:李郁,魏建忠,朱良强,谢倩,殷宗俊,孙裴,詹松鹤,何长生,杨勇,李吕
木。DB34/T 1577—2011
1
规?;沓≈碓不凡《静》揽丶际豕娉?br/>1 范围
本标准规定了猪圆环病毒病的诊断技术、预防和控制措施。
本标准适用于规?;沓≈碓不凡《静〉募嗖?、诊断以及预防和控制。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 5749 生活饮用水卫生标准
GB 7959 粪便无害化卫生标准
GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程
GB/T 17823 集约化猪场防疫基本要求
GB/T 17824.2 规模猪场生产技术规程
GB/T 17824.3 规模猪场环境参数及环境管理
GB 18596 畜禽养殖业污染物排放标准
GB/T 21674 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法
农医发[2010]33号 跨省调运乳用、种用动物产地检疫规程
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
规?;沓?intersive pig farms
采用现代养猪技术与设施设备,实行自繁自养、全年均衡生产工艺,存栏基础母猪 100 头以上的
养猪场。
3.2
基础母猪 foundation sow
已经产出第一胎,处于正常繁殖周期的母猪。
3.3
猪圆环病毒病 Porcine Circovirus Disease ,PCVD DB34/T 1577—2011
2
以猪圆环病毒 2 型(Porcine circovirus type 2,PCV2)为主要病原,单独或继发/混合感染其
它致病微生物的一系列疾病,包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎-肾病综合征(PDNS)、
猪增生性坏死性肺炎(PNP)、仔猪先天性脑震颤(CT)、母猪繁殖障碍(PRF)、肉芽肿性肠炎等。
4 诊断
依据流行特点、临床症状和病理变化等做出初步诊断,确诊需要依靠实验室诊断。实验室诊断方法
包括病原学和血清学诊断。
4.1 流行特点
猪是 PCV2 的天然宿主,各种年龄、不同性别的猪都可感染,但并不都能表现出临诊症状。病猪和
带毒猪是主要的传染源,感染猪自鼻液、粪便等排泄物中排出病毒,经消化道、呼吸道引起传播。也可
经胎盘垂直传播。
4.1.1 PMWS
主要侵害 6~12 周龄仔猪。一般于断奶后 2~3 d 或 1 周开始发病,发病率为 5%~30%,病死
率为 5%~40%不等,常常由于并发或继发其他细菌(如副猪嗜血杆菌、链球菌等)或病毒感染而使死
亡率大大增加,有时高达 50%以上。
4.1.2 PDNS
通常发生于 8~18 周龄的猪,发病率为 0.15%~2%,有时达到 7%。
4.1.3 PNP
主要危害 6~14 周龄的猪,发病率为 2%~30%,病死率为 4%~10%。
4.1.4 CT
多发生于初产母猪所产的仔猪,一般在生后第一周发病,发病率为 1%~3%,也有高达 l0%左右。
4.1.5 PRF
主要危害初产的后备母猪。
4.1.6 肉芽肿性肠炎
主要发生于 40~70 日龄的猪,发病率为 10%~20%,病死率为 50%~60%。
4.2 临诊症状
4.2.1 PMWS
消瘦或生长迟缓,皮肤苍白,呼吸困难,皮下淋巴结肿大,有时出现腹泻,黄疸。
4.2.2 PDNS
皮肤发生圆形或不规则形的隆起,呈红色或紫色、中央黑色的病灶,常融合形成条带和斑块。病灶
最先出现在猪体后 1/4、四肢和腹部,然后蔓延到胸部、腰背部和耳部。
4.2.3 PNP DB34/T 1577—2011
3
咳嗽和呼吸困难,部分猪全身潮红以及因微循环障碍导致耳尖、尾端及股、前肢腋下皮肤瘀血、出
血。
4.2.4 CT
新生仔猪的头部、四肢和尾部发生不同程度的双侧性震颤,严重者常在出生后1周内因无法吮奶而
饿死。
4.2.5 PRF
流产,产死胎、木乃伊胎和弱仔,仔猪断奶前死亡率升高。
4.2.6 肉芽肿性肠炎
腹泻,病初拉黄色粪便,后期拉黑色粪便,生长迟缓。
4.3 病理变化
4.3.1 PMWS
——眼观病变,病尸消瘦,皮肤苍白;全身淋巴结肿大,特别是腹股沟、肠系膜、支气管淋巴结显
著肿大,切面灰黄色,或有出血;肺脏肿胀,间质增宽,质地坚硬似橡皮样,其上散在有大小
不等的褐色实变区;肾脏肿大,苍白,被膜下有坏死灶,皮质与髓质交界处出血;脾脏轻度肿
大;肝脏硬变;有时胃的食管部黏膜水肿和非出血性溃疡,肠道尤其是回肠和结肠段肠壁变薄,
肠管内液体充盈。
——组织学病变,肉芽肿性间质性肺炎,气管上皮坏死或脱落并演发为细支气管炎;淋巴组织多灶
性凝固性坏死;肝、肾、胰脏实质细胞变性、坏死,并伴有不同程度的淋巴细胞浸润;??杉?br/>嗜碱性胞浆包涵体。
4.3.2 PDNS
——眼观病变,后肢和会阴部,乃至全身出现明显的坏死性皮炎;肾脏肿大、苍白,皮质部有出血
或淤血斑点。
——组织学病变,出血性坏死性皮炎和动脉炎以及渗出性肾小球性肾炎和间质性肾炎,并因此出现
胸腔和心包积液。
4.3.3 PNP
——眼观病变,弥漫性间质性肺炎,颜色灰红色。
——组织学病变,增生性和坏死性肺炎,肺泡中出现坏死细胞、大量巨噬细胞及蛋白样物质、Ⅱ型
肺细胞增生及坏死性细支气管炎;偶尔可见肺泡中出现大量多核巨细胞及单核细胞浸润引起的
肺泡膈变厚的现象。
4.3.4 CT
——眼观无明显病变。
——组织学病变,主要为中枢神经系统髓鞘形成不全或缺少,尤其是脊髓。
4.3.5 PRF
——眼观病变,流产或死亡胎儿的肝脏充血,心脏肥大和多处心肌变色。 DB34/T 1577—2011
4
——组织学病变,大面积的心肌变性坏死,伴有水肿和轻度的纤维化,还有中度的淋巴细胞和巨噬
细胞浸润。
4.3.6 肉芽肿性肠炎
——眼观病变,肠系膜淋巴结肿大,肠粘膜明显增厚。
——组织学病变,大肠和小肠的淋巴集结中出现肉芽肿性炎症和淋巴细胞缺失。肉芽肿性炎症的特
点是上皮细胞和多核巨细胞浸润,并在组织细胞和多核巨细胞的细胞质中出现大的、酸性或碱
性梭状的包涵体。
4.4 实验室诊断
4.4.1 病毒的分离与鉴定
无 PCV 污染的猪肾细胞系(PK15)最常用于 PCV2 的分离。取患病或死亡猪的肺脏、淋巴结、肾
脏、血清等作为病原的分离材料。由于 PCV2 在细胞培养中不产生细胞病变,因此,病料盲传 1~3 代
后应进行 PCV2 抗原或核酸的检测加以鉴定。
4.4.2 病毒的检测
采用聚合酶链式反应(PCR)方法直接检测病料中的 PCV2 核酸,按照 GB/T 21674 执行。
4.4.3 抗体的检测
采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪血清中的 PCV2 抗体,具体操作按照附录 A 执行。
5 结果判定
5.1 初步诊断
符合 4.1、4.2、4.3 的,诊断为疑似 PCVD。
5.2 确诊
符合 5.1,且实验室诊断 4.4.2 检测结果阳性,或 4.4.3 检测结果阳性(注:未经PCVD疫苗免疫),
可判断为 PCVD。
6 预防与控制
实行以“预防为主”的综合性防控措施。
6.1 预防措施
6.1.1 严格引种检疫
按照农医发[2010]33号文要求对引进种猪进行检疫,按照4.4.2 执行,PCV2 核酸阴性者可引进。
猪群引进后需隔离饲养 1 个月,复检 PCV2 的感染状况,阳性猪转为肉用,确认阴性者方可进入猪场
生产区。
6.1.2 加强饲养管理 DB34/T 1577—2011
5
6.1.2.1 母猪分娩前要清洗、消毒体表,并驱除寄生虫。
6.1.2.2 避免交叉哺乳,若有必要,则应限制在分娩后 24 h 内,并以同胎次原则执行。
6.1.2.3 采用相对独立的小猪圈,原则上一窝一圈。
6.1.2.4 坚持全进全出制度,两批猪之间要对圈舍及用具彻底清扫消毒,至少留出 1 周以上的空置时
间。同一猪舍内的进猪时间控制在一周之内,并有与邻舍分割的独立的粪尿排出系统。对粪尿和污水处
理按照 GB 7959 执行。
6.1.2.5 降低养猪密度,保育期 0.33 m2
/ 猪,育肥期> 0.75 m2
/ 猪。
6.1.2.6 增加喂料器空间,> 7 cm/仔猪。
6.1.2.7 严禁不同大小、不同批次的猪只混养。
6.1.2.8 有必要的防鼠、防鸟、防虫设施或者措施。
6.1.2.9 减少和控制日常管理、生产和防疫等环节中的应激因素,如接种、剪齿、断尾、阉割、打耳
号、断奶、转群、混群等。
6.1.3 改善环境质量
6.1.3.1 按照 GB 7959,GB/T 17824.2,GB/T 17824.3,GB 18596 执行。
6.1.3.2 猪舍空气: NH3<10 ppm,CO2<0.1%,相对湿度<85%。
6.1.3.3 猪舍温度:仔猪第一周 32~35℃,每隔一周调低 2℃,直至 20℃。
6.1.4 提高营养水平
6.1.4.1 使用优质全价饲料,保证猪群营养均衡。
6.1.4.2 仔猪饲料中添加柠檬酸,改善肠道微生态平衡,保证充足饮水,水质符合 GB 5749。
6.1.4.3 严禁饲喂发霉变质的饲料。
6.1.5 坚持消毒制度
6.1.5.1 按照 GB/T 17823 执行,将定期消毒工作贯穿于养猪生产的各个环节。
6.1.5.2 猪舍每周消毒 1 次,通道与排污沟每周消毒 2 次,人员与物品进入随时消毒;猪舍周围环
境,每月清扫消毒 1 次。
6.1.5.3 选择高效、广谱、安全的消毒剂,如次氯酸钠、氢氧化钠、过氧乙酸等,现配现用,且定期
更换交替使用。
6.1.6 合理免疫接种
6.1.6.1 PCVD 疫苗免疫
1) 后备母猪:配种前作基础免疫两次,间隔 3 周,产前一个月加强一次,每次 2 mL/头。
2) 经产母猪:跟胎免疫,首次在产前 6~7 周和 3~4 周分别接种一次,每次 2 mL/头;以
后在产前一个月加强一次,2 mL/头。
3) 仔猪:2~4 周龄免疫一次,间隔 3 周加强一次,每次 1 mL/头。
4) 公猪和其他成年猪:实施普免,每半年免疫 1 次,每次 2 mL/头。
6.1.6.2 其他主要传染病免疫
做好猪蓝耳病、猪瘟、猪伪狂犬病、猪气喘病等疫苗的免疫接种。
6.1.7 药物预防 DB34/T 1577—2011
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6.1.7.1 尚无针对 PCV2 的特异性药物,平时预防可选用双黄连、板蓝根和黄芪多糖等中药抗病毒和提
高机体免疫力。
6.1.7.2 通过实验室检验确定本场的主要继发感染病原菌,定期进行药物敏感试验,根据结果选用适
合本场的高敏药物,最好是长效制剂,以预防和控制细菌性继发或混合感染。
6.1.7.3 哺乳仔猪在 3、7、21 日龄分别注射高敏药物;断奶前 1 周至断奶后 1 月,用高敏药物拌料饲
喂。母猪在产前 1 周和产后 1 周,饲料中添加高敏的抗菌药物。
6.2 控制措施
6.2.1 净化猪群
采取综合防控、疫苗免疫接种、病原及抗体监测的净化策略。鉴于饲养时间和经济代价,可在原种
猪场实行。
6.2.1.1 采样
——所有引进的种公、母猪;
——第一世代猪的不同生长阶段(保育阶段、育成阶段)均按 20%比例抽取。
6.2.1.2 监测
6.2.1.2.1 样品
a) 种公猪的血清、精液;
b) 种母猪的血清;
c) 第一世代猪的血清。
6.2.1.2.2 内容
a) 种公猪的血清、精液的 PCV2,血清的 PCV2 抗体;
b) 种母猪血清的 PCV2 及 PCV2 抗体;
c) 第一世代猪血清的 PCV2 及 PCV2 抗体。
6.2.1.2.3 方法
a) 按照 GB/T 21674 进行 PCV2 病原监测;
b) 按照附录 A 进行 PCV2 抗体监测。
6.2.1.3 淘汰
——种公猪的精液检测为 PCV2 阳性者,不作种用。
——血清 PCV2 检测结果为阳性的种公、母猪,应隔离 2 周,并复检一次,两次检测结果均为阳
性者应给予淘汰,不作种用。
6.2.2 控制
根据流行特点、临诊症状、病理变化,结合病原学或血清学检测做出的诊断结果可作为发生 PCVD
的依据。
6.2.3 隔离
确认发生 PCVD 时,应将疑似感染猪、发病猪与健康猪进行分栏、隔离,限制人员、用具流动,对
严重感染猪、病死猪及污物的处理按照 GB 16548 执行。
6.2.4 消毒DB34/T 1577—2011
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发生 PCVD 时,所有猪场环境、用具应严密消毒,消毒剂选择及消毒要求同 6.1.5。产房每天消毒
1 次,保育舍每 2 天消毒 1 次,育肥舍每周消毒 2 次,外环境每周清扫消毒 1 次。
6.2.5 免疫
对受威胁猪群进行隔离监测,并按照 6.1.6.1 进行免疫接种。
6.2.6 治疗
一旦发生 PCVD,在饲料或饮水中添加抗生素类药物、电解多维和免疫增强剂(如黄芪多糖等),
有助于控制其他细菌继发感染,提高猪体抵抗力,降低死亡率。 DB34/T 1577—2011
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AA
附 录 A
(规范性附录)
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪圆环病毒 2 型(PCV2)抗体
A.1 材料和试剂
A.1.1 主要仪器
A.1.1.1 含 450 nm 和 630 nm 波长酶标仪
A.1.1.2 37℃ 恒温设备
A.1.1.3 可调微量移液器
A.1.2 主要试剂
包被板,酶结合物,浓缩洗涤液,底物,显色剂,样本稀释液,终止液,阳性对照,阴性对照,不
干胶膜,自封袋。
A.2 检测步骤
A.2.1 洗涤液配制
用蒸馏水将浓缩洗涤液按 1:10 稀释,充分混匀即为工作洗涤液。
A.2.2 样本稀释
用样本稀释液将待检血清按 1:40 稀释,充分混匀。阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。
A.2.3 加样反应
每次试验设阴性对照 2 孔、阳性及空白对照各 1 孔(分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液 100
uL)。样本检测孔每孔加已稀释血清样本 100 uL。37℃ 避光反应 30 min。甩去孔内液体,每孔注满
工作浓度洗涤液洗涤 3 次,每次均需停留 1 min;最后一次甩净,拍干。
A.2.4 加酶反应
除空白对照孔外,其余每孔加酶结合物1滴,37℃ 避光反应 30 min。甩去孔内液体,如上洗涤,
拍干。
A.2.5 显色反应
加底物和显色剂各 1 滴,以空白对照调零,用酶标仪于 450 nm 波长(630 nm 作为参比波长)读
取 OD 值。
A.2.6 参考值
A.2.6.1 Cut-off 值(COV)=阴性对照平均 OD 值×2.1(阴性对照孔 OD 值<0.08 时按 0.08 计)。
A.2.6.2 有效性判定
——空白对照孔 OD 值<0.05(若大于 0.05 则实验无效); DB34/T 1577—2011
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——阴性对照孔 OD 值≤ 0.10(若大于 0.10 则实验无效);
——阳性对照孔 OD 值 ≥ 0.3(若小于 0.3 则实验无效)。
A.2.6.3 结果判定
——样本 OD 值≥COV 值时,判为猪圆环病毒抗体阳性;
——样本 OD 值<COV 值时,判为猪圆环病毒抗体阴性。
A.3 注意事项
A.3.1 包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时,应平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的板条
应即时放回有干燥剂的自封袋中,4℃ 密封保存。
A.3.2 滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀,首滴弃去;滴加试剂时瓶身应保持竖直。
A.3.3 瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶盖之间不可混用。
A.3.4 孵育时,推荐使用水浴箱。如无水浴箱,可取密封湿盒放入 37℃ 温箱内使用。
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